A guanidin-tiocianát 593-84-0 megkönnyíti a nukleotidok és peptidek extrakcióját az állati zsigerekből

Guanidin-tiocianát | 593-84-0 | erős fehérjedenaturáns. Ez egy fehér kristályos por, irritáló és fényérzékeny. Oldódik etanolban és vízben, olvadáspontja 118℃. A guanidin-tiocianátot főként denaturálásra használják, sejtek lízise és RNS és DNS kivonása. A nukleinsav extrakció általános kémiai összetevője.

A cn111500664a számú szabadalom eljárást ismertet nukleotidok és polipeptidek extrahálására állati zsigerekből guanidin-tiocianát alkalmazásával. A nukleotidok purinbázisból vagy pirimidinbázisból, ribózból vagy dezoxiribózból és foszforsavból álló vegyületek, amelyeket széles körben használnak a gyógyászatban, anya- és gyermektermékekben, fűszerekben és élelmiszer-adalékanyagokban. A polipeptid α- A peptidkötésekkel összekapcsolt aminosavak által képzett vegyületek a fehérjehidrolízis közbenső termékei, amelyek az emberi hormonok, idegek, sejtnövekedés és szaporodás különböző területeit érintik. Jelentőségük a szervezet különböző rendszereinek és sejtjeinek élettani funkcióinak szabályozásában, a szervezetben lévő releváns enzimek aktiválásában, a köztes metabolikus membránok permeabilitásának elősegítésében, vagy a DNS-transzkripció szabályozásában vagy a specifikus fehérjeszintézis befolyásolásában rejlik, végül specifikus élettani hatások kiváltásában.

Az állati zsigerek nukleotidokban és peptidekben gazdagok, de jelenleg a nukleotidok és peptidek extrakciója többnyire külön történik, ami erőforrás-pazarlást és összetett folyamatokat eredményez. A guanidin-tiocianát segít a nukleotidok és peptidek kinyerésében az állati zsigerekből. A konkrét módszerek a következők:

Először mossa le a friss állatok zsigereit, csepegtesse le, vágja fel, majd törje össze, adjon hozzá ionmentes vizet, hogy megkapja a kevert oldatot, majd adjon hozzá guanidin -tiocianát -oldatot az elegyhez, vibrálja és jól keverje össze, majd álljon fel. Ezután szilícium -dioxidot tartalmazó hordozót adunk hozzá, mert a guanidin -tiocianát hasítja a sejteket, és a sejtekből felszabaduló nukleotidok egyesülnek a szilícium -dioxid -hordozóval. Vegye ki a szilícium -dioxidot tartalmazó hordozót, szívja fel és válassza el eluálószerrel, hogy tisztított nukleotidokat kapjon.

Ezután NaCl -oldatot adunk a maradék oldathoz, amelyből a szilícium -dioxid -hordozót kivettük, a kevert oldatot extraháljuk, majd összetett proteázt adunk hozzá, majd mikrohullámú enzimatikus hidrolízist végzünk, az enzimatikus hidrolízis oldatot vízfürdőben melegítjük. , centrifugáljuk, a felülúszót elvesszük, és a polipeptidet fagyasztva szárítás után nyerjük.

Ez a módszer azt a tulajdonságot használja ki, hogy a guanidin-tiocianát elpusztíthatja a sejtszerkezetet és denaturálja a fehérjét. Nemcsak nukleotidokat és peptideket képes egymás után extrahálni, hanem az egyszerű módszer és a nagy hatékonyság előnyei is vannak. Ugyanakkor elkerülhető a biokémiai reagensek közötti reakciók problémája is, amikor biokémiai reagenseket adunk hozzá extrakcióhoz.